La actriz María Botto posee una amplia experiencia tanto en teatro, como en cine y televisión. Entre las producciones teatrales destaca su papel protagónico en Entre tu deseo y el mío, escrita por Juan Diego Botto, con dirección de Cristina Rota. También sus trabajos en El zoo de cristal, dirigida por Agustín Alezzo; Antígona, llevada a escena por Mauricio García Lozano y Rudolf, Lo bueno de las flores es que se marchitan pronto, y Cabaret Borges. El pez detrás de los espejos, las tres obras con dirección de Cristina Rota. Asimismo, a las órdenes de la directora y pedagoga ha trabajado en Retrato de mujer con sombras. Mal dormir, Lorca al rojo vivo, Homenaje a Federico García Lorca, Lorca, y No se puede matar al duende.
En la gran pantalla hay que subrayar su interpretación en Soldados de Salamina, de David Trueba, que le valió la nominación a los Goya en 2003 por la Mejor interpretación femenina de reparto. También su actuación en Celos, de Vicente Aranda, por la que fue nominada en 1999 al Goya a la Mejor actriz revelación y por la que consiguió el Premio a la Mejor actriz revelación en el Festival de Cine de Toulouse ese mismo año.
Stico, de Jaime de Armiñán; Si te dicen que caí y Carmen, ambas de Vicente Aranda; Silencio roto, de Montxo Armendáriz; Los abajo firmantes, y Hablar de Joaquín Oristrell; y Mi vida en ruinas, de Donald Petrie son otros de los títulos cinematográficos de la actriz. Su última aparición ha sido en Resucitado, de Kevin Reynolds (2016).
María Botto ha trabajado también en numerosas series televisivas, entre ellas las reconocidas Buena conducta y Bajo sospecha, ambas de 2016, y Mad dogs de 2011.
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